Tout travail effectué au cours d'une période d'au moins 9 heures consécutives comprenant l'intervalle entre minuit et 5 heures est considéré comme travail de nuit. La période commence au plus tôt à 21 heures et s'achève, au plus tard, à 7 heures. À l'intérieur de ces bornes obligatoires, la période de travail de nuit est définie par accord collectif (à défaut d'accord collectif, tout travail accompli entre 21 heures et 6 heures est considéré comme du travail de nuit).
L'accord collectif de l'entreprise utilisatrice qui institue le travail de nuit doit prévoir des contreparties sous forme de repos compensateur et, le cas échéant, sous forme de compensation salariale.